Csak, hogy pár szót azért mégis írjak a szakdolgozatról (most sem vagyok sokkal elõbb az irodalommal):
Humán sejteket tenyésztek (HepG2 vonal, humán hepatokarcinóma, halhatatlan sejtek), amelyeket etídium-bromidos (EtBr) kezelésnek teszünk ki.
Az EtBr-ot DNS jelölõ festékként használják (pl. gélen való elõhívásra, vagy real-time PCR során), a bázisok közé interkalál és ekkor megnövekedik a fluoreszcenciája, így a kettõs szálú DNS detektálható.
Viszont pont az interkalálódó tulajdonsága miatt mutagén is, fõképp pontmutációkat okoz. Attardi írta le elõször, hogy megfelelõ koncentrációban alkalmazva a mitokondriális DNS (mtDNS) kipucolható, mert annyi mutáció keletkezik rajta, míg a nukleáris DNS megmarad (a nukleáris DNS javító apparátusa jobb mûködése miatt).
Az így kialakult sejtvonalat hívják rho nullás (rho0)sejtvonalnak. A rho0-ás sejtek mitokondriumaiból hiányzik a mtDNS, de a mitokondriumok megmaradnak, bár elvesztik formájukat, ún. szellem mitokondriumok lesznek.
Érthetõen azok a fehérjék sem lesznek jelen, amelyeket a mtDNS kódol, ezek mind az elektron transzport lánc (ETC) fehérjéi.
Az ETC hiányában a sejtek csak a glikolízisbõl nyerhetnek energiát, így voltaképp anaerobok lesznek és így is lehet kezelni õket, mint anaerobok.
A tézisem fõ kérdése, hogy anaerob körülmények között, hogyan megy a mitokondriális oxidatív folding.
A foldingról elöljáróban annyit, hogy ez a naszcens fehérjék cisztein (Cys) szulfhidril (-SH) csoportjainak oxidációjáról van szó, amely révén kialakul a két Cys között egy diszulfid híf (-S-S-). Ebben a folyamatban szükség van egy elektron akceptorra, amely a szulfhidril oxidációjakor redukálódik, és a két elektront fogadja.
Aerob esetben ismert a folyamat: a mitokondriális belsõ membránjában, az intermembrán térbe nézõ (IMS) van egy fehérje, az Erv1, amely egy FADH2 prosztetikus csoportot tartalmazó szulfhidril oxidáz, katalizálja ezt a folyamatot, és az elektronokat az ETC-be juttatja!
Így jön elõ a kérdés, hogy mindez hogyan történik abban az esetben, mikor az elektronok nem juthatnak az ETC-be O2 hiánya miatt, avagy anaerob körülmények között, ugyanis ismert, hogy ilyenkor is van mt. fehérje folding.
A témavezetõm szerint van egy alternatív elektron akceptor, és ha ez igaz, akkor majd ezzel a molekulával a foldingot fokozni tudjuk.